紫外可見分光光度計(jì)是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。
紫外可見分光光度計(jì)四個(gè)方面的條件設(shè)定：
(1)狹縫寬度
狹縫寬度過大，入射光的單色性差；狹縫寬度太小，入射光的強(qiáng)減弱。狹縫寬度過大或過小均會(huì)造成靈敏度降低，較佳選擇是產(chǎn)生較小誤差情況下的較大狹縫。一般選用儀器的狹縫寬琶度應(yīng)小于待測樣品吸收帶的半寬度，否則測得的吸光度值會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸光度不再；加為準(zhǔn)，對(duì)于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
(2)測量波長
在定量分析中，為了提高測定的靈敏度，入射光的波長應(yīng)選擇被測物的較大吸收波長λmax，如果λmax有干擾，可選擇另一條靈敏度稍低、但能避免干擾的譜線，所以，適當(dāng)選擇入射光的波長，不僅能提高測定的靈敏度，還能提高測定的準(zhǔn)確度。
(3)空白溶液的選擇
空白溶液是用來調(diào)節(jié)吸光度測量工作零點(diǎn)即A=0，T=的溶液，以消除溶液中其它基體組分以及吸收池和溶劑對(duì)入射光的反射和吸收所帶來的誤差。根據(jù)情況不同，常用空白溶液有如下幾種選擇。
①溶劑空白當(dāng)溶液中只有待測組分在測定波長下有吸收，而其它組分無吸收時(shí)，可用純?nèi)軇┳骺瞻住?/div>
②試劑空白如果顯色劑或其它試劑有吸收，而待測試樣溶液無吸收，則用不加待測組分的其它試劑作空白。
③試樣空白如果試樣基體有吸收，而顯色劑或其它試劑無吸收，則用不加顯色劑的試樣溶液作空白。
(4)控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶?/div>
可通過控制被測物濃度或改變吸收池厚度來實(shí)現(xiàn)吸光度合理的范圍，以盡量減小測量誤差。一般吸光度盡量控制在0.1-0.8范圍。
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